芍药Actin基因在大肠杆菌中的高效表达

• 作者: 史国安 张文婷 徐杰 范丙友 高水平
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 芍药 Actin 大肠杆菌 SDS-PAGE电泳 高效表达
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 1661-1665
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.11.019

摘要

目的 构建芍药Paeonia lactiflora Actin (PlActin)基因原核表达载体,优化PlActin基因在大肠杆菌中的高效表达体系.方法 基于PlActin基因cDNA序列及原核表达载体pET-32a(+)多克隆位点序列,设计一对5'末端分别插入BamHⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的特异性PCR引物,基于RT-PCR技术亚克隆P1Actin基因;用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒pMD 18-T-PlActin和原核表达载体pET-32a(+),胶回收纯化目的基因和空载体,连接、转化后应用菌落PCR、质粒PCR和双酶切鉴定出重组子pET-32a (+)-PlActin,转化BL21 (DE3)菌株获得基因表达工程菌;分别设置诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度梯度、诱导的菌体起始密度梯度及表达时间梯度,诱导PlActin基因在大肠杆菌中表达,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝R250染色后制备干胶并比较重组Actin蛋白的表达量.结果 亚克隆测序结果表明PlActin与目的序列完全一致,且其编码区序列(CDS)上下游成功插入了BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点;成功构建了芍药原核表达载体pET-32a(+)-PlActin;诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L,诱导的菌体起始密度(A600)为0.4～0.6,最佳表达时间为4h.结论 构建了P1Actin基因原核表达载体pET-32a (+)-P1Actin,建立了P1Actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史国安	河南科技大学农学院	79	628	13.0	22.0
2	范丙友	河南科技大学农学院	32	245	8.0	14.0
3	高水平	河南科技大学林学院	19	147	7.0	11.0
4	张文婷	河南科技大学农学院	5	18	2.0	4.0
5	徐杰	河南科技大学农学院	4	13	2.0	3.0