全细胞催化合成L-苯基乳酸重组大肠杆菌的构建

• 作者: 朱益波 王颖 范铭 薛素妹 钱凯 齐斌
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: L-苯基乳酸 L-乳酸脱氢酶 巨大芽孢杆菌 重组大肠杆菌 全细胞转化
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 13-17
• 页数: 5页
• 字数: 3738字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201512003

摘要

苯基乳酸是一种新型天然广谱抑菌物质,L-乳酸脱氢酶是微生物转化苯丙酮酸合成L-苯基乳酸的关键酶,通过构建过量表达L-乳酸脱氢酶的重组大肠杆菌,提高大肠杆菌合成L-苯基乳酸(苯基乳酸,phenyllactic acid,PLA)的能力.以Bacillus megaterium Z2013513基因组为模板,经PCR扩增得到L-乳酸脱氢酶基因,连接表达载体pET-28a(+)并导入到大肠杆菌BL21(DE3),获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a-ldhL.SDS-PAGE电泳和酶活分析表明,约在40 ku处出现显著特异性条带,粗酶液酶活力达3.4 U/mg.在37℃、200 r/min条件下,25g/L(干重)重组大肠杆菌经60 min将70.32 mmol/L苯丙酮酸全细胞转化合成50.59 mmol/L L-苯基乳酸.由于具有较高的产物光学纯度(96.98％e.e.)和底物摩尔转化率(71.94％),表明一步生物转化法能高效地合成￡-苯基乳酸.