白假丝酵母菌最优化 RNA 提取策略的探索

• 作者: 李赛男 祁文瑾
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 白假丝酵母菌 RNA 聚合酶链反应 溶壁酶
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论 著 Original Research
• 页码范围: 176-179
• 页数: 4页
• 分类号: R379.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2015.02.013

摘要

目的：探索白假丝酵母菌总 RNA 简单、快捷、高效的提取方法。方法选取昆明医科大学第一附属医院妇产科门诊2011年7月—2013年3月有临床症状且阴道分泌物镜检阳性的外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）患者的白假丝酵母菌40株，选用不同时间与温度组合下的4种溶壁酶（Lyticase）破壁方案（A 方案：37℃、12 h，B 方案：25℃、12 h，C 方案：37℃、24 h，D 方案：25℃、24 h）进行 RNA 提取，将所得 RNA 进行荧光定量 PCR（qPCR）反应验证 RNA 的浓度及纯度，并进行管家基因18S rRNA 的检测。结果 D 方案提取获得的 RNA 浓度高于 A、B、C 方案（P ＜0.05）；B 方案提取获得的 RNA 浓度高于 A、C 方案（P ＜0.05）；而 A、C 两方案提取获得的 RNA 浓度比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。B、D 方案获得的 RNA 纯度高于 A、C 方案（P ＜0.05）；但 A、C 方案获得的 RNA 纯度比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）；B 方案提取获得的 RNA 纯度高于 D 方案（P ＜0.05）。A、B、C、D 方案提取的 RNA 扩增产物 Ct 转化值比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）；其中 B、D 方案 qPCR 扩增产物 Ct 转化值高于 A、C方案（P ＜0.05）；但 B、D 方案及 A、C 方案之间的 qPCR 扩增产物 Ct 转化值比较，差异无统计学意义（ P ＞0.05）。管家基因18S rRNA 的引物扩增出的产物片段大小为150 bp。结论以 Lyticase 破壁提取白假丝酵母菌具有简单易行及RNA 产量高、纯度好的优点，值得临床推广应用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李赛男	昆明医科大学第一附属医院妇产科	5	3	1.0	1.0
2	祁文瑾	昆明医科大学第一附属医院妇产科	21	49	3.0	6.0