无血清悬浮分离培养法分离、培养、鉴定脊髓源性神经干细胞

• 作者: 付强 刘彦斌 徐大波 李军
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 培养 脊髓源性 神经干细胞 无血清悬浮分离培养法 鉴定 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2015,（50）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 8161-8166
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 6308字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.50.022

摘要

背景：目前临床上尚未发现完全治愈脊髓损伤，使其达到结构及功能恢复的治疗方法。已有的神经营养因子治疗方法促进神经细胞再生的效果有限，而干细胞移植治疗可能是现阶段修复脊髓损伤的有效方法之一。<br>　　目的：无血清悬浮分离培养法培养胎鼠脊髓源性神经干细胞，采用形态学、免疫荧光技术和多向分化能力进行神经干细胞鉴定。<br>　　方法：应用悬浮分离培养法，培养纯化孕13.5 d C57BL/6胎鼠的脊髓源性神经干细胞。倒置显微镜观察细胞形态学变化；CCK-8法检测细胞的增殖能力。免疫荧光技术检测Nestin和Sox2表达；使用自然分化法验证第4代脊髓源性神经干细胞多向分化特性，明确其分化能力。<br>　　结果与结论：采用无血清悬浮分离培养法可以顺利获取脊髓源性神经干细胞。培养的脊髓源性神经干细胞增殖活性良好，高表达Nestin和Sox2，且两种标记物与DAPI核染高度均匀吻合，说明细胞纯度高。进一步诱导分化显示，细胞可以向GFAP和Tuj1阳性细胞分化，证明脊髓源性神经干细胞分化潜能较好。该实验可建立一套体外培养脊髓源性神经干细胞分离、培养、纯化及鉴定体系，为后续神经干细胞的应用研究奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付强	解放军第二军医大学附属长海医院脊柱外科	12	16	2.0	4.0
2	李军	解放军第二军医大学附属长海医院脊柱外科	89	324	9.0	12.0
3	刘彦斌	解放军第二军医大学附属长海医院脊柱外科	17	43	5.0	5.0
4	徐大波	解放军第二军医大学附属长海医院脊柱外科	1	1	1.0	1.0