共沉默miR-221-3p/222-3p表达抑制骨髓间充质干细胞增殖及促成软骨分化

• 作者: 吴波 周德山 孙婷怡 孙海梅 季凤清 张秀英 曹丹丹 杨姝 郭多 闫继红
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 骨髓干细胞 成软骨分化 miR-221-3p miR-222-3p 慢病毒表达载体 骨髓间充质干细胞 沉默miRNA 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2015,（50）
• 所属期刊栏目: 研究与报告 -- 骨髓干细胞
• 页码范围: 8056-8061
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 5751字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.50.004

摘要

背景：基于干细胞的组织工程技术作为治疗骨关节损伤修复的有效手段，具有广泛的应用前景。研究表明miRNA在调控干细胞向软骨分化过程中具有重要的作用。<br>　　目的：探讨共感染慢病毒介导的反义miR-221-3p/222-3p(microRNA-221-3p，microRNA-222-3p)对人骨髓间充质干细胞成软骨分化的作用，为临床软骨损伤修复提供新的策略。<br>　　方法：利用miRNA基因芯片技术筛选转化生长因子β3诱导人骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中不同阶段表达差异的miRNA，并利用荧光实时定量PCR(RT-qPCR)验证；构建慢病毒人反义miR-221-3p/222-3p载体(Lv-miR-221-3p-inhibition ， Lv-miR-222-3p-inhibition)并共转染人骨髓间充质干细胞，空载体组(Lv-GFP)以及未转染组作为对照。利用CCK-8法检测沉默miR-221-3p/222-3p 6 d后细胞的增殖情况；通过番红O染色法、免疫组织化学方法以及RT-PCR验证各组软骨诱导21 d后软骨分化相关标志物的表达。<br>　　结果与结论：构建的Lv-miRNA-221-3p/222-3p inhibition共转染人骨髓间充质干细胞，成功沉默了细胞中的miR-221-3p/222-3p表达水平；miRNA基因芯片与RT-qPCR验证结果显示miR-221-3p/222-3p在软骨分化后期表达明显降低；转染组与未转染组以及空载体组相比：①细胞增殖明显受到抑制。②番红O染色以及免疫组织化学显示软骨分化特征标志物硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原表达增强。③RT-qPCR也证实硫酸软骨素以及Ⅱ型胶原的mRNA表达也明显上调。结果显示沉默人骨髓间充质干细胞miRNA-221-3p/222-3p，抑制了细胞增殖并促进了成软骨分化。