肿瘤坏死因子-α对关节软骨细胞外基质降解代谢的影响

• 作者: 曾晖 梁浩锋 翁鉴 肖德明 辛风 雷鸣
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 肿瘤坏死因子-α 软骨细胞 基质金属蛋白酶 固醇调节元件结合蛋白-2
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 3106-3109
• 页数: 4页
• 字数: 4229字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2015.12.058

摘要

目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对关节软骨细胞外基质降解代谢的影响.方法 体外分离培养C57BL/6J小鼠关节软骨细胞,实验用第2代细胞,随机分为4组,第1组为空白对照组,第2～4组均加入10 μg/L TNF-α刺激,作用时间分别为24、48、72 h.采用倒置相差显微镜对各组软骨细胞进行形态学观察,免疫组织化学法对细胞进行染色与鉴定,噻唑蓝(MTT)比色法检测各组软骨细胞的增殖活力,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测各组软骨细胞内目的基因基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)、蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原(collagenⅡ)的mRNA表达.结果 倒置相差显微镜观察可见,正常软骨细胞向圆形、多角形转化;免疫组织化学染色显示第2代软骨细胞collagenⅡ染色胞质呈明显棕黄色.MTT检测结果显示,与空白对照组比较,各时间段的TNF-α刺激组吸光度(A)值明显降低(P＜0.01),且随时间的延长而降低明显(24 h:86.7％,48 h:78.0％,72 h:73.5％).Real-time PCR结果表明,与空白对照组比较,各TNF-α刺激组的MMP-13及SREBP-2 mRNA的表达量均上调,且随时间延长而升高[24 h:0.142±0.073、1.555 ±0.087(P＜0.05);48 h:0.178 ±0.005、1.917 ±0.153(P＜0.01);72 h:0.197±0.062、2.187 ±0.135(P＜0.01)].aggrecan、collagenⅡmRNA表达量则随时间延长而降低[24 h:0.689±0.064、0.567 ±0.038(P＜0.05);48 h:0.620 ±0.049(P＜0.01)、0.304 ±0.029(P＜0.05);72 h:0.114 ±0.078、0.092 ±0.009(P<0.01)].结论 TNF-α能诱导软骨细胞产生MMP-13,破坏细胞外基质代谢的平衡,促进降解代谢作用.此外,在此过程中SREBP-2的表达与软骨关键基因的表达呈负相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	辛风	北京大学深圳医院骨关节科	29	93	6.0	7.0
2	曾晖	北京大学深圳医院骨关节科	45	182	8.0	10.0
3	雷鸣	北京大学深圳医院骨关节科	21	388	7.0	19.0
4	肖德明	北京大学深圳医院骨关节科	37	255	9.0	14.0
5	翁鉴	北京大学深圳医院骨关节科	9	32	3.0	5.0
6	梁浩锋	北京大学深圳医院骨关节科	2	4	2.0	2.0