Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白 ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析

• 作者: 唐媛媛 李群 沈继龙 莫绪维 蔡亦红 陈鹤
• 来源期刊: 安徽医药
• 关键词: 弓形虫 棒状体蛋白16 克隆 表达 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 页码范围: 675-678,679
• 页数: 5页
• 字数: 4032字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-6469.2015.04.018

摘要

目的：构建弓形虫Chinese 1基因型TgCtWh3（以后均简称Wh3）株棒状体蛋白（ rhoptry protein ，ROPs）16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物，采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段，克隆至pMD18-T载体；经PCR及测序分析鉴定；阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2，分别转化大肠杆菌BL21和DH5α，PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列；将构建的原核表达菌株经IPTG诱导，SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达；将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞，观察其在细胞中表达；采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3 D结构。结果各组均PCR扩增出约2．1 kb ROP16基因的特异片段，序列检测结果均正确；分别亚克隆到原核表达载体pET-28a和真核表达载体pEGFP-C2中，成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒；原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白；真核表达质粒在293T细胞中成功表达，成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以pET-28a和pEGFP-C2为载体，分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒，并构建出其3D结构图。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡亦红	安徽医科大学公共卫生学院卫生检验检疫系	13	82	5.0	9.0
2	沈继龙	安徽医科大学基础医学院寄生虫学教研室	153	854	13.0	17.0
3	李群	安徽医科大学基础医学院病原与免疫学实验室	32	100	5.0	8.0
4	唐媛媛	安徽医科大学基础医学院病原与免疫学实验室	15	49	4.0	6.0
5	陈鹤	安徽医科大学第一附属医院检验科	11	7	2.0	2.0
6	莫绪维	安徽省六安市人民医院检验科	1	0	0.0	0.0