木薯内标准基因定性PCR方法分析

• 作者: 刘恩平 易小平 李美英 杨小亮 谢翔 贺萍萍 郭安平
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 木薯 内标准基因 定性PCR 种内一致性 种间特异性
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 193-199
• 分类号: S19
• 语种: 中文

摘要

内标准基因对于转基因植物及其产品的定性定量PCR检测起着决定性的作用,木薯内标准基因的系统研究是木薯转基因成分检测的基础.在木薯的DFCI(http://compbio.dfci.harvard.edu/tgi/plant.html)数据库中,选择了有可能作为木薯内标基因的一些EST序列,包括亲环蛋白2(cyclophilin type 2,DB934316)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因B亚单位(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Bsubunit,TC445)GAPDH、Actin基因(TC2158与TC3381的拼接序列)、Alpha-tubulin(TC8072)基因,Polyubiquitin(TC9946),亚麻苦苷酶(linamarase,TC 1540)6个基因序列,设计了7对定性PCR的引物(CP2、Actin、GAPDH、PUBQ2、Tublina1、Tublina2和LAM1),并进行了种内一致性、稳定性和种间特异性测试分析.结果表明,只有木薯的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因B亚单位的GAPDH定性PCR引物扩增系统在木薯的22个不同品种中都能够得到一致性稳定性的扩增结果,在大戟科其他植物及其他非大戟科植物没有发现非特异性扩增产物.另外6个基因(CP2、Actin、PUBQ2、Tublina1、Tublina2和LAM1)的定性PCR引物扩增系统在大戟科其他植物及非大戟科植物中都有非特异性的扩增产物.因此GAPDH定性PCR引物扩增系统初步符合内标准基因的种内一致性,稳定性,种间特异性的特点,可应用于转基因木薯成分定性PCR检测.