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采用TOPO TA克隆技术构建人CC10质粒并在BEAS-2B细胞中的表达
采用TOPO TA克隆技术构建人CC10质粒并在BEAS-2B细胞中的表达
作者:
刘阳
张心浩
曹平平
王男
龙小博
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
Clara细胞10-kD蛋白
基因克隆
基因表达
呼吸道上皮细胞
炎症
摘要:
目的:采用TOPO TA克隆技术构建及鉴定人CC10基因表达载体,并在支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞中获得稳定表达,初步探讨CC10在呼吸道上皮细胞炎症反应中的作用.方法:提取人下鼻甲组织的总RNA,逆转录反应生成cDNA,再用PCR方法扩增出含人CC10编码区全长的DNA片段,将PCR产物直接连接到pcDNA3.1N5-His TOPO TA载体中,转化至大肠杆菌后经筛选鉴定出CC10表达载体,用脂质体法将CC10质粒转染到BEAS-2B,细胞免疫荧光法检测CC10蛋白的表达.随后用促炎细胞因子IL-1β刺激转染空质粒和CC10质粒的BEAS-2B细胞,用实时定量RT-PCR和ELISA检测炎性趋化因子RANTESmRNA和蛋白的表达.结果:目的基因与TOPO TA载体在室温下5 min的连接反应效率91.7%,用酶切法鉴定质粒并测序,人CC10基因成功克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,CC10蛋白在BEAS-2B细胞中无表达,但在体外转染CC10质粒后CC10蛋白表达明显增高.转染CC10质粒的BEAS-2B细胞可抑制IL-1β诱导的RANTES mRNA和蛋白的表达.结论:利用TOPOTA克隆技术可高效、快速的构建人CC10基因表达载体,并能够在BEAS-2B细胞中获得稳定表达,CC10蛋白在呼吸道上皮细胞中可发挥抗炎作用.
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文献信息
篇名
采用TOPO TA克隆技术构建人CC10质粒并在BEAS-2B细胞中的表达
来源期刊
现代生物医学进展
学科
医学
关键词
Clara细胞10-kD蛋白
基因克隆
基因表达
呼吸道上皮细胞
炎症
年,卷(期)
2015,(30)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
5801-5805
页数
分类号
Q786|R765
字数
语种
中文
DOI
10.13241/j.cnki.pmb.2015.30.001
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
刘阳
华中科技大学同济医学院附属同济医院耳鼻咽喉头颈外科
31
76
5.0
7.0
2
王男
华中科技大学同济医学院附属同济医院耳鼻咽喉头颈外科
4
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曹平平
华中科技大学同济医学院附属同济医院耳鼻咽喉头颈外科
9
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4
龙小博
华中科技大学同济医学院附属同济医院耳鼻咽喉头颈外科
7
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张心浩
华中科技大学同济医学院附属同济医院耳鼻咽喉头颈外科
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研究主题发展历程
节点文献
Clara细胞10-kD蛋白
基因克隆
基因表达
呼吸道上皮细胞
炎症
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
现代生物医学进展
主办单位:
黑龙江省森工总医院
哈尔滨医科大学附属第四医院
出版周期:
旬刊
ISSN:
1673-6273
CN:
23-1544/R
开本:
16开
出版地:
黑龙江省哈尔滨市和兴路32号
邮发代号:
14-12
创刊时间:
2001
语种:
chi
出版文献量(篇)
22114
总下载数(次)
63
总被引数(次)
99951
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