Chn1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株的构建和鉴定

• 作者: 吴美善 庞新利 廖碧红 张键 李江华 熊玮 罗林杰 董少红
• 来源期刊: 广东医学
• 关键词: 血管平滑肌细胞 趋化素 Chn1基因 RNA干扰 慢病毒
• 年，卷（期）: 2015,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2495-2498
• 页数: 4页
• 字数: 3452字
• 语种: 中文

摘要

目的：通过慢病毒介导的RNA干扰技术，构建趋化素基因Chn1的小分子干扰RNA慢病毒表达载体，建立Chn1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株，为下一步采用该细胞株研究趋化素与冠状动脉介入治疗后再狭窄的关系奠定实验基础。方法以小鼠Chn1基因mRNA序列作为干扰靶点，设计3组靶向Chn1的shRNA序列，构建慢病毒载体，并筛选出干扰最佳的shRNA，在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠血管平滑肌细胞，转染慢病毒形成Chn1基因缺陷性血管平滑肌细胞株，用实时定量荧光（ real time） PCR检测感染慢病毒后细胞中Chn1 mRNA水平。结果基因测序结果表明慢病毒载体构建成功，慢病毒的滴度约为7.4×106TU／mL。3个pLVX－shRNA均能下调Chn1 mRNA，其中pLVX－shRNA3的沉默效果最明显（P＜0.01）。将干扰效果最佳的慢病毒载体pLVX－shRNA3包装慢病毒并转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株，用real time PCR血管平滑肌细胞中Chn1 mRNA水平，该细胞株中Chn1 mRNA水平显著下降（ P＜0.01）。结论慢病毒介导的siRNA可有效沉默血管平滑肌细胞中Chn1基因的表达。