含人干细胞白血病基因的重组慢病毒表达载体的构建及鉴定

• 作者: 于建超 倪钊 李应龙 李强 王勤章 王文晓 王新敏 王江平 钱彪
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 糖尿病膀胱异常病症 干细胞白血病基因 慢病毒载体 转染 Cajal样间质细胞
• 年，卷（期）: 2015,（44）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 15-17
• 页数: 3页
• 分类号: R587.1
• 字数: 2545字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2015.44.005

摘要

目的：构建含人干细胞白血病（SCL）基因的重组慢病毒表达载体（GV287-SCL），为糖尿病膀胱异常病症（ DCP）的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法将人SCL基因质粒内的遗传物质扩增，与慢性病毒穿透质粒结合，构建重组穿梭质粒GV287-EGFP／SCL，共转染293T 细胞，通过多次感染、扩增和提纯，得到重组慢病毒GV287-SCL。以不同浓度重组慢病毒原液感染293 T细胞，采用Western blotting法检测目的基因，荧光标记法计算病毒滴度。结果人SCL基因扩增产物大小为1036 bp，与目的基因相关片段中SCL cDNA大小相同。阳性转化子扩展后均形成503 bp条带，其大小与目的片段人SCL cDNA相当。重组质粒GV287-EGFP／SCL阳性克隆的目的基因SCL成功插入到GV287-EGFP，基因排序和GenBank信息库里的人SCL基因mRNA基本相同。重组慢病毒滴度为5×108 TU／mL。结论成功构建了GV287-SCL，病毒滴度为5×108 TU／mL。本研究为继续进行SCL基因体内转染及开展DCP的基因治疗提供了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王勤章		108	274	9.0	11.0
2	倪钊		34	72	3.0	7.0
3	李应龙		26	72	3.0	8.0
4	王新敏		24	26	3.0	3.0
5	李强		41	228	8.0	14.0
6	王江平		25	81	5.0	8.0
7	钱彪		45	49	4.0	4.0
8	于建超	石河子大学医学院	1	1	1.0	1.0
9	王文晓		4	5	1.0	2.0