解偶联蛋白UCP1启动子荧光素酶报告基因载体的构建

• 作者: 刘旭 卢晓昭 杨国栋 王姗 韦梦影
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 解偶联蛋白UCP1 启动子 转录调控 荧光素酶报告系统 药物筛选
• 年，卷（期）: 2015,（25）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 4838-4841
• 分类号: Q342|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2015.25.009

摘要

目的:构建解偶联蛋白UCP1启动子荧光素酶报告基因载体,为寻找调控UCP1表达的小分子化合物提供有效工具.方法:从小鼠基因组DNA中PCR扩增小鼠UCP1启动子上游2000 bp序列,并将该序列连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建pGL3-UCP1启动子.测序正确后,提取质粒,然后将上述载体与pRL-TK载体共转染至HEK293细胞、小鼠白色脂肪前体细胞和小鼠棕色脂肪前体细胞,48h后裂解细胞检测荧光素酶的活性.结果:通过PCR成功扩增获得了目的片段,并将其克隆至pGL3-basic中.与细胞内源UCP1表达水平相似,荧光素酶报告系统表明构建的pGL3-UCP1在棕色脂肪细胞中启动子活性最高,在白色脂肪细胞中活性较低,在HEK293细胞中基本没有活性.同时β3肾上腺素受体激动剂CL 316,243同样能够上调pGL3-UCP1的启动子活性.结论:成功构建了小鼠UCP1启动子荧光素酶报告基因载体,并证明在棕色脂肪细胞中,该启动子具有很强的启动子活性,而在白色脂肪和HEK293细胞中,启动子活性很低.该启动子报告系统有望为寻找激活UCP1的小分子化合物提供重要平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨国栋	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	17	38	2.0	5.0
2	王姗	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	5	3	1.0	1.0
3	卢晓昭	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	6	14	2.0	3.0
4	韦梦影	第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室	9	12	2.0	2.0