乳糖诱导对重组大肠杆菌表达CGTase的影响

• 作者: 林新坚 林晓栩 邱宏端 陈济琛 陈龙军
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: Geobacillus CHB1 环糊精葡萄糖基转移酶 乳糖 IPTG 诱导表达
• 年，卷（期）: 2015,（17）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 114-120,126
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2015.17.015

摘要

以重组环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)表达菌株BL21(DE3)作为研究对象,比较IPTG和乳糖诱导对重组大肠杆菌表达CGTase量的影响,确定优化诱导方式.以Geobacillus CHB1的基因组DNA为模板,采用PCR技术克隆CGTase基因;利用分子操作技术构建携带有大肠杆菌OmpA信号肽的分泌型表达质粒pEASY-E2-OmpA-CGT,重组质粒热激转化至Escherichia coli BL21中进行表达;在摇瓶发酵条件下,分别以IPTG和乳糖作为诱导剂,通过SDS-PAGE分析和测定胞外酶活,确定优化诱导方式.CGTase基因在Escherichia coli BL21中实现表达,且具有一定量的重组CGTase分泌至胞外;乳糖诱导的蛋白表达量优于IPTG诱导,不易形成包涵体;乳糖最佳的诱导起始菌浓度OD600为1.4,诱导浓度、温度分别为0.5％和25℃,分批流加乳糖5次和一次性加入,重组CGTase表达量无明显差异;经初步优化,胞外酶活达19.87 U/mL.Geobacillus CHB1 CGTase基因在大肠杆菌中成功实现胞外表达,乳糖可替代IPTG诱导重组CGTase.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈济琛	福建省农业科学院土壤肥料研究所	88	786	15.0	23.0
2	林新坚	福建省农业科学院土壤肥料研究所	186	2041	26.0	33.0
3	邱宏端	福州大学生物科学与工程学院	58	717	16.0	25.0
4	陈龙军	福建省农业科学院土壤肥料研究所	12	21	3.0	3.0
5	林晓栩	福州大学生物科学与工程学院	2	4	1.0	2.0