重组蛋白LuxS诱导表达及纯化条件的优化

• 作者: 孟祥晨 张筠 杨杰
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 重组蛋白 LuxS 诱导表达 纯化 自诱导物2
• 年，卷（期）: 2015,（19）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 170-175
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.3
• 字数: 5875字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201519030

摘要

目的:优化重组蛋白LuxS诱导表达及纯化条件,提高具有生物活性的重组蛋白LuxS的表达量,为体外合成自诱导物2 (autoinducer-2,AI-2)奠定基础.方法:采用单因素试验,优化诱导培养基、诱导温度、诱导前菌体生物量、诱导时间以及异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)的浓度;采用Ni-NTAPurification System对重组蛋白进行纯化,比较Native Elution Buffer的咪唑浓度和pH值对重组蛋白纯化的影响,确定最佳的Native Elution Buffer;对比蛋白与树脂结合时不同缓冲液的纯化效果,选择最优的结合缓冲液.结果:重组蛋白的最佳诱导表达条件为:以LB培养基为诱导培养基,菌液OD600 nm为0.6～0.8,IPTG浓度为0.1 mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为12h.采用添加3 mol/L NaC1的磷酸盐缓冲液作为蛋白与树脂结合的缓冲液,含500 mmol/L咪唑的Native Elution Buffer (pH 6.5)作为蛋白洗脱液.使用分离获得的LuxS蛋白合成的AI-2生物活性约为阳性对照的6倍.结论:本研究成功优化了重组蛋白LuxS的诱导表达及纯化条件,获得了具有生物活性的重组蛋白,并成功合成了AI-2.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟祥晨	东北农业大学乳品科学教育部重点实验室	116	913	17.0	25.0
2	杨杰	东北农业大学乳品科学教育部重点实验室	9	25	3.0	4.0
3	张筠	东北农业大学乳品科学教育部重点实验室	4	60	3.0	4.0