泛素特异性蛋白酶18在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性的影响研究

• 作者: 刘安文 国畅阔 曾小莉 汪弋汀 熊乐 蔡婧 陈雅洁 颜伟
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 肝肿瘤 泛素特异性蛋白酶 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（33）
• 所属期刊栏目: 论 著 Original Research
• 页码范围: 4077-4083
• 页数: 7页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2015.33.013

摘要

目的：检测泛素特异性蛋白酶18（USP18）在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性（细胞增殖、细胞克隆、细胞周期、细胞凋亡）的影响。方法2013年7月—2014年7月选取5种肝癌细胞株（Hep G2、Hep G2.2.15、Hep 3B、Huh -7、SMMC -7721），采用实时荧光定量 PCR（RT - PCR）和 Western blotting 法分别检测 USP18 mRNA 和USP18表达水平，选择表达活性最强的细胞株进行小干扰 RNA（siRNA）转染。利用 LipofectamineTM 2000法将 USP18 siRNA 转染肝癌细胞，分为正常组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组。采用RT - PCR和 Western blotting法检测干扰效率，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线，平板克隆形成实验检测克隆形成率，流式细胞术检测细胞周期，Annexin V - FITC/ PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果5种肝癌细胞株中 USP18 mRNA 和 USP18表达水平比较，差异有统计学意义（P ＜0.05），其中Hep 3B肝癌细胞株中 USP18 mRNA 和 USP18表达水平高于其他4种肝癌细胞株（P ＜0.05），故选取Hep 3B肝癌细胞株进行后续实验。Hep 3B肝癌细胞株转染 USP18 siRNA 后48 h，转染效率达（91.00±5.67）％。5组干扰效率比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）；其中 siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组干扰效率高于正常组和阴性对照组（P ＜0.05）。转染后1、2、3 d，siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组吸光度低于正常组和阴性对照组（P ＜0.05）。siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组克隆形成率低于正常组和阴性对照组，细胞凋亡率高于正常组和阴性对照组（P ＜0.05）。5组细胞周期分布比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。正常组与阴性对照组吸光度、克隆形成率、细胞周期分布、细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论 USP18在Hep 3B肝癌细胞株中的表达较高，USP18基因敲减可以抑制肝癌细胞增殖、减少细胞克隆、阻滞细胞周期进程，增加细胞凋亡。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘安文	南昌大学第二附属医院肿瘤内科	57	289	10.0	14.0
2	蔡婧	南昌大学第二附属医院肿瘤内科	19	131	7.0	11.0
3	熊乐	南昌大学第二附属医院肿瘤内科	4	24	3.0	4.0
4	颜伟	江西省肿瘤医院内六科	2	2	1.0	1.0
5	曾小莉	南昌大学第二附属医院肿瘤内科	2	2	1.0	1.0
6	汪弋汀	南昌大学第二附属医院肿瘤内科	1	2	1.0	1.0
7	陈雅洁	南昌大学第二附属医院肿瘤内科	1	2	1.0	1.0
8	国畅阔	南昌大学第二附属医院肿瘤内科	1	2	1.0	1.0