凋亡素原核表达载体构建及活性测定

• 作者: 张艳玲 徐霞 杜晶春 江露含
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 实验动物 基因病毒载体及相关因子模型 凋亡素蛋白 原核表达 纯化 活性测定
• 年，卷（期）: 2015,（18）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 基因病毒载体及相关因子与动物模型
• 页码范围: 2928-2932
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 6107字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.18.025

摘要

背景：体外合成或通过基因工程表达的凋亡素 Apoptin 是一种可以特异性地诱导肿瘤细胞凋亡，而对人体正常细胞无毒性和转化活性的蛋白，为抑制肿瘤的生长提供可能。<br>　　目的：构建凋亡素基因的原核表达载体，优化诱导蛋白表达的相关条件，检测纯化所得目的蛋白的活性。<br>　　方法：将已构建好的凋亡素基因亚克隆至原核表达载体 pET-28b(+)中，将该质粒转化至大肠杆菌E.coli宿主菌中，以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对其进行诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析目的蛋白，并检测所表达的目的蛋白对肿瘤细胞的增殖抑制作用。<br>　　结果与结论：凋亡素基因被成功的克隆至 pET-28b(+)，在26℃、IPTG 0.5 mmol/L诱导8 h的情况下，Apoptin为包涵体表达，表达产物经 SDS-PAGE 分析，在相对分子质量约15000的位置出现目的蛋白条带，大小与预期结果一致，经变复性和亲和层析纯化后，获得高纯度目的蛋白，进一步检测发现其对肺癌细胞 H460及H1299具有一定的促凋亡作用。实验成功构建了凋亡素原核表达载体PET-28b-Apoptin，获得了具有一定生物活性的目的蛋白，为进一步研究凋亡素的功能和开发其应用价值研究奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐霞	广州医科大学金域检验学院	28	73	5.0	7.0
2	杜晶春	广州医科大学金域检验学院	16	44	4.0	6.0
3	张艳玲		13	57	5.0	7.0
4	江露含	广州医科大学金域检验学院	1	2	1.0	1.0