小鼠乳鼠原代心肌细胞的改良培养

• 作者: 刘芬 孟琳琳 盖敏涛 陈小翠 陈邦党 马依彤 黄莺
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织工程 心肌细胞 小鼠乳鼠 原代细胞培养 酶消法 Ⅱ型胶原蛋白酶 作用时间 心肌搏动 细胞簇 温度 pH值 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2015,（37）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 组织构建细胞学实验
• 页码范围: 5993-5997
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 4977字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.37.017

摘要

背景：大鼠心肌细胞原代培养技术日渐成熟，但小鼠心肌细胞在同样实验条件下不易获得，而小鼠基因组与人类基因组有更多相似之处，具有更高的研究价值。<br>　　目的：改进小鼠乳鼠原代心肌细胞的培养方法，得到纯度高、活力强、保持心肌细胞原有结构和功能的心肌细胞。<br>　　方法：将小鼠心肌组织利用酶消方法分离为单个的心肌细胞，实验步骤中将经典的胰酶、胶原蛋白酶混合酶消法分解开，先用胰酶消化心肌组织，使心肌组织变得松散，再用胶原蛋白酶，作用于细胞间质的胶原纤维，使心肌组织分离为单个的心肌细胞。调整胰酶和Ⅱ型胶原蛋白酶的浓度和作用时间，严格控制试剂pH值和各步骤的温度。<br>　　结果与结论：心肌细胞在接种24 h后开始贴壁，48 h后可观察到部分心肌细胞出现自主搏动，72 h后彼此形成交联，96 h后可观察到心肌细胞形成细胞簇，并出现一致性搏动。心肌细胞的存活率和纯度均达95%以上。结果证实，实验采用改良方法成功培养出小鼠乳鼠心肌细胞，并且保留心肌细胞的结构和功能，纯度和成活率高，是可行的培养方法。