稳定高表达 CYP2 E1基因肝癌HepG2细胞系的构建

• 作者: 李敬东 杨召 熊永福 闫再华
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: CYP2 E1基因 慢病毒载体 肝癌 HepG2细胞
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 页码范围: 8-10
• 页数: 3页
• 分类号: R73
• 字数: 2809字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2015.07.003

摘要

目的：构建稳定高表达CYP2E1基因的肝癌HepG2细胞系。方法通过NCBI查询CYP2E1的编码序列，设计并构建表达质粒pLV（Exp）-Puro-CMVm-CYP2E1，用载体对应的慢病毒包装质粒（pMDLg／pRRE、pRSV-REV和pMD2．G）共同转染293T细胞。利用携带CYP2E1基因的慢病毒（Lenti-CYP2E1-eGFP-Puro）感染HepG2细胞系，采用嘌呤霉素抗性筛选方法构建高表达CYP2 E1肝癌HepG2细胞系。增强绿色荧光蛋白检测转染情况，荧光定量PCR及Western blotting检测HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1 mRNA和蛋白。结果 HepG2细胞系均成功转染CYP2E1基因。 HepG2、空载及转染CYP2E1基因的HepG2细胞系中CYP2E1 mRNA相对表达量分别为1．02±0．06、1．06±0．05、7．42±0．07，蛋白相对表达量分别为0．26±0．02、0．29±0．01、1．61±0．08，转染CYP2E1基因的HepG2细胞系与前两者比较，P均＜0．05。结论通过慢病毒转染成功构建了稳定高表达CYP2 E1基因的肝癌HepG2细胞系。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李敬东	川北医学院附属医院	121	526	12.0	15.0
2	熊永福		10	15	2.0	3.0
3	闫再华		3	11	2.0	3.0
4	杨召		4	8	1.0	2.0