禽传染性支气管炎病毒M41株反向遗传株的构建

• 作者: 吴暄 姬高升 李然 杨鑫 王红宁 许记刚
• 来源期刊: 中国畜牧兽医文摘
• 关键词: IBV M41株 反向遗传
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础科学
• 页码范围: 62-63
• 页数: 2页
• 字数: 2530字
• 语种: 中文

摘要

禽传染性支气管炎病毒是目前危害禽养殖业的重大传染病之一.由于病毒基因组大、操作困难,给研究其基因组结构开发有效的疫苗带来了困难.本研究在对IBV M41毒株全基因组序列测序的基础上用DNAStar软件的MapDraw程序分析酶切位点的分布情况,将全基因组分为14段分段扩增.采用Primer6设计含No See'm酶切位点,在5'端引入T7启动子核心序列的引物,分段克隆于PMD19-T载体,通过引入的"No See'm式"Bsa I和BsmB I酶切位点,将亚克隆体外拼接成基因组全长cDNA.再通过5'端引入的T7启动子核心序列对基因组全长cDNA进行体外转录,使用电击的方法将全长转录物转染BHK-21细胞,转染后转入SPF鸡胚培养,鉴定成功获得了IBV M41拯救株.为研究IBV强毒株的致病机理、毒力位点及IBV新型疫苗的研究提供了参考,奠定了基础.