登革2型病毒NS1基因真核表达载体的构建及意义

• 作者: 何莉 易小芳 罗春华
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒,2型 NS1 真核表达
• 年，卷（期）: 2015,（32）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-10,109
• 页数: 4页
• 分类号: R373.33
• 字数: 2528字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2015.32.003

摘要

目的：构建登革2型病毒（DENV2）NS1基因的真核表达载体，为筛选与NS1相互作用的蛋白以及研究机体抵抗登革病毒感染的作用机制奠定基础。方法以DENV2感染THP1细胞的cDNA为模板，采用RT-PCR法扩增具有Flag标签的NS1全长基因，并将其克隆至pSG5质粒中，构建pSG5-NS1-Flag真核表达载体。筛选阳性克隆，分别进行酶切及测序鉴定。采用脂质体转染法将真核表达载体分别转染293T细胞和A549细胞，Western blot-ting法检测细胞NS1蛋白表达。结果扩增后具有Flag标签的NS1全长基因片段大小为1089 bp，与预期目的片段大小相符。载体和目的基因NS1都含1个ECORⅠ位点，单酶切片段大小分别为463、4722 bp，NS1扩增片段和pSG5质粒的双酶切片段大小分别为1089、4100 bp；6个阳性克隆中，5、6号克隆酶切片段符合预期大小，并经序列鉴定证实。293T细胞和A549细胞转染空载体后，NS1融合蛋白表达极低，转染真核表达载体后均有NS1融合蛋白表达。结论本研究成功构建了pSG5-NS1-Flag真核表达载体，为与NS1相互作用的免疫调控蛋白、NS1蛋白翻译后修饰以及机体免疫系统抵御登革病毒感染机制的相关研究奠定了基础。