miR-217慢病毒表达载体及稳转胶质瘤细胞系的构建

• 作者: 叶晶亮 吴峰 张淑霞 苏国军 苏陈 赵保 郑林丰 韩瑞章
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: miR-217 胶质瘤细胞 慢病毒 基因表达
• 年，卷（期）: 2015,（14）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2625-2628
• 分类号: Q78|R739.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2015.14.007

摘要

目的:构建miR-217慢病毒表达载体并建立稳定表达miR-217的胶质瘤细胞系,为深入研究miR-217在胶质瘤细胞生长及功能中的作用及机制提供条件.方法:利用人基因组中miR-217前体序列,设计并合成引物.采用PCR的方法扩增含miR-217前体的目的片段,酶切后连接至慢病毒表达载体pLVX-EGFP-Puro.将带有miR-217前体的慢病毒载体及辅助质粒用脂质体的方法转染293细胞,24小时后收集上清液测定病毒滴度.利用实时定量PCR检测miR-217的表达水平,确定慢病毒载体的表达能力.将病毒感染胶质瘤细胞系U251,通过荧光观察和嘌呤霉素(Puromycin)筛选,获得稳定转染miR-217的胶质瘤细胞系.结果:克隆的miR-217前体目的片段经PCR检测和测序分析,序列完全正确、无突变.实时定量PCR检测发现慢病毒感染293T细胞后,miR-217的表达水平明显升高(P＜0.01),表明miR-217慢病毒表达载体构建成功.经嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜观察发现细胞均有稳定的绿色荧光表达,并且miR-217的表达水平显著升高(P＜0.01),是对照组的12.5倍.结论:成功构建了miR-127慢病毒表达载体和稳转胶质瘤细胞系,为后续研究奠定了良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑林丰	上海交通大学附属第一人民医院放射科	46	150	7.0	9.0
2	吴峰	解放军第98医院心血管内科	17	19	2.0	4.0
3	赵保	解放军第98医院神经外科	15	69	4.0	8.0
4	叶晶亮	解放军第98医院神经外科	4	5	2.0	2.0
5	韩瑞章	解放军第98医院神经外科	2	2	1.0	1.0
6	苏国军	解放军第98医院神经外科	7	27	3.0	5.0
7	张淑霞		1	0	0.0	0.0
8	苏陈	解放军第98医院心血管内科	1	0	0.0	0.0