重组慢病毒沉默 rictor 基因对 mTORC2/SGK1信号通路及肺泡上皮钠离子通道的调控作用?

• 作者: 王导新 秦克 钟曦
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 呼吸窘迫综合征,成人 rictor 基因 慢病毒属
• 年，卷（期）: 2015,（26）
• 所属期刊栏目: ? 论 著 ?
• 页码范围: 3601-3604
• 页数: 4页
• 分类号: R563.8
• 字数: 4360字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2015.26.001

摘要

目的：构建针对 mTORC2特异组成蛋白中 rictor 基因的重组慢病毒沉默载体,研究其对 mTORC2/SGK1信号通路的调控机制及其对肺泡上皮细胞钠离子通道的影响,并探讨其在急性呼吸窘迫综合征及急性肺损伤中的作用。方法构建目的基因的 rictor 干扰质粒及空载质粒并与慢病毒包装体系共转染293T 细胞,收集病毒上清液,经离心、浓缩及纯化获取重组慢病毒。测定病毒滴度,感染 A549细胞并筛选细胞稳定株,RT-PCR 验证目的基因 rictor 沉默情况。采用 PCR 和 western blot 检测该通路中各信号指标表达情况。结果成功构建沉默 rictor 基因的重组慢病毒并感染 A549细胞和获得细胞稳定株。与空白组及对照组相比,shRNA-rictor 组中 rictor 和下游 SGK1、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC mRNA 水平均有明显下降(P <0.05)。同时, shRNA-rictor 组中 rictor 和下游 SGK1、P-SGK、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC 的蛋白水平较前两组均有明显下降(P <0.05)。结论沉默 rictor 基因对 mTORC2/SGK1信号通路有明显的调控作用,同时从基因和蛋白水平影响肺泡上皮细胞α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC 的表达。mTORC2/SGK1可能是调控肺泡上皮细胞对肺泡液的清除能力,同时影响肺水肿形成的重要信号通路。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王导新	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	161	650	13.0	18.0
2	钟曦	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	2	0	0.0	0.0
3	秦克	重庆医科大学附属第二医院呼吸内科	2	8	1.0	2.0