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摘要:
目的:构建针对 mTORC2特异组成蛋白中 rictor 基因的重组慢病毒沉默载体,研究其对 mTORC2/SGK1信号通路的调控机制及其对肺泡上皮细胞钠离子通道的影响,并探讨其在急性呼吸窘迫综合征及急性肺损伤中的作用。方法构建目的基因的 rictor 干扰质粒及空载质粒并与慢病毒包装体系共转染293T 细胞,收集病毒上清液,经离心、浓缩及纯化获取重组慢病毒。测定病毒滴度,感染 A549细胞并筛选细胞稳定株,RT-PCR 验证目的基因 rictor 沉默情况。采用 PCR 和 western blot 检测该通路中各信号指标表达情况。结果成功构建沉默 rictor 基因的重组慢病毒并感染 A549细胞和获得细胞稳定株。与空白组及对照组相比,shRNA-rictor 组中 rictor 和下游 SGK1、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC mRNA 水平均有明显下降(P <0.05)。同时, shRNA-rictor 组中 rictor 和下游 SGK1、P-SGK、α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC 的蛋白水平较前两组均有明显下降(P <0.05)。结论沉默 rictor 基因对 mTORC2/SGK1信号通路有明显的调控作用,同时从基因和蛋白水平影响肺泡上皮细胞α-ENaC、β-ENaC、γ-ENaC 的表达。mTORC2/SGK1可能是调控肺泡上皮细胞对肺泡液的清除能力,同时影响肺水肿形成的重要信号通路。
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文献信息
篇名 重组慢病毒沉默 rictor 基因对 mTORC2/SGK1信号通路及肺泡上皮钠离子通道的调控作用?
来源期刊 重庆医学 学科 医学
关键词 呼吸窘迫综合征,成人 rictor 基因 慢病毒属
年,卷(期) 2015,(26) 所属期刊栏目 ? 论 著 ?
研究方向 页码范围 3601-3604
页数 4页 分类号 R563.8
字数 4360字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1671-8348.2015.26.001
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 王导新 重庆医科大学附属第二医院呼吸内科 161 650 13.0 18.0
2 钟曦 重庆医科大学附属第二医院呼吸内科 2 0 0.0 0.0
3 秦克 重庆医科大学附属第二医院呼吸内科 2 8 1.0 2.0
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研究主题发展历程
节点文献
呼吸窘迫综合征,成人
rictor 基因
慢病毒属
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
重庆医学
半月刊
1671-8348
50-1097/R
大16开
重庆市渝北区宝环路420号
78-27
1972
chi
出版文献量(篇)
30732
总下载数(次)
32
总被引数(次)
193615
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