农杆菌介导创伤胚转化的应用

• 作者: 刘龙龙 周建平 孙毅 崔林 康国帅 张丽君 张建珍
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 植物转化 燕麦 玉米 高粱
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 25-28
• 页数: 4页
• 分类号: S188
• 字数: 5140字
• 语种: 中文

摘要

[目的]优化农杆菌介导创伤胚转化的方法,提高转化率,培育具有特定功能的转基因品种,改善作物的生存能力和生态环境适应力.[方法]参照农杆菌划胚介导植物萌发种子基因转化方法,以燕麦、玉米和高粱的萌发种子为试验材料,农杆菌菌株LBA4404(含质粒P3301ubiAc)侵染转化燕麦、玉米和高粱的萌发种子,优化转化条件,探索燕麦、玉米和高粱遗传转化体系,探讨菌液浓度、种子萌发时间、超声波功率、乙酰丁香酮和草丁膦浓度对3种作物的影响并进行比较分析.[结果]农杆菌菌液浓度为0.6＞ OD600≥0.4时转化效果最佳;第1次超声波功率为900 W,处理时间为10 min;第2次超声波功率为200 W,处理时间为4 min效果最佳.转化效率最高;添加乙酰丁香酮对燕麦、高粱和玉米的发芽有明显促进作用,但转化效果有明显区别;燕麦、玉米和高粱的转化植株对草丁膦的耐受性差异不大,与非转化植株相比,0.8 mg/L除草剂胁迫下燕麦、玉米和高粱种子萌发受到一定程度的抑制.用1 mg/L除草剂溶液对T0和T1代转化植株幼苗进行筛选,转化植株的存活率高于对照.[结论]经除草剂筛选和PCR对L和T1代幼苗检测,初步证明获得了转化植株.