基于固定化Pronase E酶与质谱的糖链结构分析方法

• 作者: 于子翔 应万涛 张曼丽 钱小红
• 来源期刊: 分析试验室
• 学科: 化学
• 关键词: 糖蛋白 糖链结构 固定化PronaseE 基质辅助激光解吸飞行时间质谱
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告与研究简报
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: Q55|O657.63
• 语种: 中文
• DOI: 10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2016.0001

摘要

位点特异性糖链结构的解析,是糖蛋白质结构分析面临的巨大挑战.PronaseE蛋白水解酶,能够降解糖蛋白或糖肽中大部分的氨基酸序列,而保留糖链与少量氨基酸的序列,与色谱、质谱分析等联用,可以实现糖链结构的鉴定,同时,保留的氨基酸序列可以辅助实现修饰位点的识别,两者结合,可以获取位点特异性糖链结构的信息.但PronaseE酶解的缺点是,酶解效率较低,常需要较高浓度的蛋白酶.本实验将PronaseE固定化在基质上,固定化后的PronaseE具备较高的局部浓度,从而实现目标糖蛋白的快速高效酶解.采用核糖核酸酶B作为标准糖蛋白,优化了PronaseE酶切的方案,包括酶切时蛋白与酶的用量比、酶切时间、固定化PronaseE酶的有效贮存时间等;同时优化选择了糖链的富集方法,并对于基质辅助激光解吸飞行时间质谱分析中,糖链适合的基质进行对比选择,从而获得更好的糖链谱图及更为丰富的糖链结构信息.