新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的假病毒阳性对照品制备

• 作者: 丁国允 师永霞 戴俊 李小波 袁帅 郑夔 黄吉城 黎东红
• 来源期刊: 华南预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 新疆出血热病毒 实时荧光RT-PCR 阳性对照品
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R-33|R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.13217/j.scjpm.2016.0001

摘要

目的 制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品.方法 人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-PCR方法检测假病毒包装情况,随后将包装成功的假病毒颗粒加核酸保护剂制备成阳性对照品,并进行稳定性试验.结果 重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞后,将收集到的细胞培养上清采用实时荧光RT-PCR进行检测,结果显示10、100、1 000、10 000倍4个倍比稀释度扩增后所得的Ct值分别为13、19、25、33,显示含高浓度的假病毒颗粒.取经1 000倍稀释后制备的阳性对照品于37℃孵箱中放置0、3、7、15、21和30 d后,提取的RNA经实时荧光RT-PCR检测,所得Ct值在25～ 28之间,表明阳性对照品有较高的热稳定性.结论 本研究通过慢病毒包装技术制备的假病毒颗粒,是新疆出血热病毒荧光RT-PCR核酸检测过程中理想的阳性对照品.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	师永霞		13	12	2.0	3.0
2	李小波		9	8	1.0	2.0
3	黄吉城		11	8	1.0	2.0
4	郑夔		12	8	1.0	2.0
5	丁国允		3	8	1.0	2.0
6	袁帅		7	0	0.0	0.0
7	黎东红		5	0	0.0	0.0
8	戴俊		7	0	0.0	0.0