小鼠TFEB基因重组腺相关病毒的构建及鉴定

• 作者: 丁广前 吕建平 欧阳丽斯
• 来源期刊: 解剖学研究
• 关键词: TFEB基因 重组质粒 腺相关病毒
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-10
• 页数: 4页
• 语种: 中文

摘要

目的 构建小鼠TFEB基因的重组8型腺相关病毒(AAV8),并通过感染293细胞观察TFEB表达情况.方法 将pUC57-mTFEB及载体质粒分别进行酶切、连接、转化,得到重组质粒pAAV-CMV-mTFEB,并进行PCR鉴定及测序;将鉴定正确重组质粒,进行AAV8病毒载体包装;正确包装病毒载体后,感染293细胞,通过Western blot观察TFEB基因在293细胞表达情况.结果 酶切鉴定和测序结果证明了pAAV-CMV-mTFEB病毒包装成功;病毒滴度4.65×1012vg/mL;细胞实验提示相比对照组,实验组TFEB基因表达水平升高6倍余(P＜0.01).结论 rAAV2/8-CMV-mTFEB构建及包装成功,并可以有效感染和表达.