流感病毒为载体重组病毒株rHCV/FLU的构建及初步评价

• 作者: 任天宇 孙芳 张绍庚 杨鹏辉 段跃强 王希良 胡雪凇
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 反向遗传学 丙型肝炎病毒 重组病毒 PR8流感病毒
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 13-18
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20160003

摘要

目的 构建及拯救以流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株rHCV/FLU并对其进行评价.方法 利用反向遗传学技术,选择流感病毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,将HCV 1b亚型的E1抗原基因经序列优化插入到PR8流感病毒NS1片段的特定位置,构建重组质粒pNS1-HCV,测序正确的重组质粒pNS1-HCV与PR8的7个重组质粒pHW191-PB2、pHW 192-PB1、pHW193-PA、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M转染共培养的COS-1和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得流感病毒为载体嵌合HCV抗原表位的重组病毒株,命名为rHCV/FLU,并通过血凝试验、RT-PCR、Westernblot、电镜观察病毒形态等方法对重组病毒鉴定.接着,重组病毒接种SPF鸡胚扩大培养、超滤浓缩、蔗糖密度梯度离心纯化.纯化获得的重组病毒抗原,滴鼻免疫Balb/c小鼠,0d、14d免疫2次,设置104TCID50、 105TCID50、 106 TCID503个剂量组,初步评价其免疫效果.结果 成功拯救重组病毒株rHCV/FLU,血凝效价(HA)为29-10,病毒滴度Log10(TCID50/md)为6.5.滴鼻免疫小鼠二免后14d取小鼠血清及脾淋巴细胞,3个剂量组针对流感病毒的血抑(HI)效价均值分别为80、640和1 280,初步证明重组病毒株rHCV/FLU在小鼠体内能够产生较强体液免疫和细胞免疫应答反应.结论 成功制备的重组病毒株rHCV/FLU在动物体内具有较好的免疫效果,为新型HCV疫苗的研制提供新的研究策略.