猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达、纯化及抗原性分析

• 作者: 佟杰 刘永刚 杨莹莹 涂亚斌 王刚 田丽红 蔡雪辉 郝立沙
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: PCV-2 0RF2 Cap蛋白 大肠杆菌 优化表达 ImageJ软件 抗原性
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 14-19
• 页数: 6页
• 分类号: S828|S852.65
• 语种: 中文

摘要

为了获取大量的有良好抗原性的猪圆环病毒2型(PCV-2)重组Cap蛋白,用于PCV-2抗体检测试剂盒的研制,试验对PCV-20RF2全长基因进行扩增,构建重组表达质粒pET-30a-Cap,转化E.coli BL21(DE3),在SDS-PAGE分析基础上,结合ImageJ和Graphpad prism 5.0软件的分析,对重组菌E.coli BL21(pET-30a-Cap)表达条件进行了优化,诱导产物纯化后,经SDS-PAGE分析及Westem-blot鉴定其抗原性.结果表明:重组Cap蛋白的最佳表达条件是当菌体浓度(OD600值)达到1.0 ～1.5时,加入终浓度为0.2mmol/L的IPTG,37℃恒温摇床175 r/min振荡培养5h;纯化获得高纯度的重组Cap蛋白,且该蛋白具有良好的反应原性.说明表达的重组Cap蛋白具有良好的抗原性,能为检测PCV-2抗体的间接ELISA试剂盒的研制提供诊断抗原.