microRNAs 的差异性表达在原发性及复发性翼状胬肉发病机制中的作用研究

• 作者: 刘佳 刘家艳 卢亚梅 周元清 崔颖 曾凤 邓洁飞 陈永铃
• 来源期刊: 中华眼科医学杂志（电子版）
• 关键词: 翼状胬肉 微RNAs 复发
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-32
• 页数: 7页
• 字数: 5637字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-2007.2016.01.005

摘要

目的：探讨microRNAs的差异性表达在原发性及复发性翼状胬肉发病机制中的作用。方法收集2012年12月至2013年12月在广州医科大学附属第六医院（清远市人民医院）眼科行住院手术治疗的翼状胬肉与眼外伤患者共30例（30只眼）的临床资料进行研究。其中，男性16例（16只眼），女性14例（14只眼）。根据病种分为原发组、复发组及对照组等共3组，各10例（10只眼）患者。原发组和复发组患者各10例（10只眼）均行单纯翼状胬肉切除术；对照组患者10例（10只眼）术中取少量正常结膜组织。所有手术由同一术者操作。采用MicroRNA芯片和荧光定量PCR（ qRT-PCR）技术检测microRNAs的表达水平。计量资料以均数±标准差（ x珋±s）的形式表示，计数资料以例数和百分比形式表示。三组间年龄和microRNAs表达水平的比较采用方差分析，当差异有统计学意义时，进一步两两比较。三组间性别、职业的比较采用χ2检验。使用聚类分析的方法，探索不同组MicroRNA表达量的关系。绘制不同组MicroRNA表达量的散点图，计算pearson相关系数，看各组之间的相关性。结果原发组、复发组及对照组患者的平均年龄分别为（41．3±6．7）岁、（47．3±8．7）岁及（39．3±11．7）岁，三组之间的年龄差别无统计学意义（F＝3．08，P＞0．05）。在上述三组中，性别为男性的患者例数与百分比分别为5例（5只眼），占50．0％；6例（6只眼），占60．0％及4例（4只眼）占40．0％。职业为从事户外职业的患者例数与百分比分别为6例（6只眼），占60．0％；7例（7只眼），占70．0％及3例（3只眼），占30．0％。三组差别无统计学意义（χ2＝0．88，1．09；P＞0．05）。通过对MicroRNA芯片结果进行聚类分析，发现复发组的MicroRNA表达谱和对照组分为一组，不同于原发组。复发组与原发组患者的MicroRNA表达谱无相关性（r＝0．57，P＞0．05），复发组与对照组有相关性（r＝0．67，P＜0．05）。三组间的组织的microRNAs表达谱差别被MicroRNA芯片检测，随后用qRT-PCR技术验证芯片结果。与原发组及对照组相比，复发组患者的MicroRNA谱与前两者显著不同，有24个microRNAs显著差异性表达。其中14个microRNAs（ miR－126、－15b、－135b、－199b、－214、－301 a、－20 a、－4496、－93、－21、－29 a、－181 a、－146 b 及－99 b ）在组织中被上调，而11个microRNAs（miR－4687、－4279、－483、－296、－652、－622、－1、－3127、－328、－361及－4533）被下调。通过蛋白印迹试验（ Western blot ）发现，在复发性翼状胬肉组织中血管内皮生长因子通路被明显激活，可能是microRNAs参与了调控。结论 microRNAs的差异性表达与翼状胬肉复发密切相关，而某些高表达的microRNAs与血管新生、上皮-间质转化以及基质成纤维细胞增加关系密切。因此，我们认为抑制某些特定MicroRNA表达可能是今后防治翼状胬肉复发的有效方法。