嗜热细菌莱廷格热袍菌TMO普鲁兰酶TMP在大肠杆菌中的原核表达与酶学性质

• 作者: 余轩 刘坤 张建华 毛多斌 迟雷 魏涛
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 普鲁兰酶 克隆表达 酶学性质 点突变体
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 16-22
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2016.08.003

摘要

利用PCR技术从嗜热细菌莱廷格热袍菌TMO中扩增得到普鲁兰酶TMP的基因(Tlet_1262),将该基因克隆至表达载体pET15b,并经IPTG诱导在大肠杆菌BL21-CodenPlus (DE3)-RIL中实现可溶性表达.通过80℃热处理和镍柱亲和层析两步纯化,得到纯化重组酶.SDS-PAGE分析表明:该酶分子质量为97.0 ku.酶学性质研究表明,该酶最适反应温度90℃,最适pH 5.4.在最适反应温度90℃处理150 min,酶活力稳定在80％以上.普鲁兰酶TMP具有较强的耐酸性,在90℃高温和pH 5.0的酸性条件处理20 h,仍保持50％以上的活性.该酶对金属离子和变性剂SDS、尿素、Tween80和Trtion-X100具有一定抗性.还原剂DTT(0.5,5 mmo1/L)对该酶活性具有明显激活作用,分别提高酶活18％和28％.在此基础上,利用重叠PCR构建普鲁兰酶TMP点突变体C501S、C649S和C704S.通过动力学分析,点突变体C649S催化普鲁兰糖和可溶性淀粉底物的效率(kcat/Km)相对于野生型分别提高37.8％和40.8％.由此推测C649位点可能与普鲁兰酶TMP催化功能密切相关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毛多斌	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	210	1782	21.0	30.0
2	魏涛	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	31	66	4.0	7.0
3	迟雷	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	7	13	2.0	3.0
4	余轩	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	2	10	2.0	2.0
5	张建华	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	1	2	1.0	1.0
6	刘坤	郑州轻工业学院食品与生物工程学院	2	12	2.0	2.0