栀子类胡萝卜素剪切双加氧酶基因GjCCD4的克隆与原核表达

• 作者: 张恩慧 王晓云 陈蓉
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 栀子 类胡萝卜素剪切双加氧酶 基因 克隆
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 34-41
• 页数: 8页
• 分类号: Q785|Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.01.007

摘要

[目的]类胡萝卜素剪切双加氧酶(Carotenoid cleavage oxygenase,CCD)是西红花总苷生物合成途径的关键酶,本研究拟从栀子果实中克隆CCD基因.[方法]在NCBI数据库中搜索CCD蛋白,获得种子序列后,构建系统进化树,按照亲缘关系分组.再利用CODEHOP法,针对每个组设计简并引物,在栀子果皮和果肉cDNA中扩增,获得保守区段.然后通过RACE获得基因全长.构建pet28a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌株后在30℃培养4h,转化菌株AriticExpression(DE3)后在15℃培养过夜,诱导蛋白表达.[结果]克隆了一个GjCCD4基因,长1 863 bp,编码的蛋白质N端序列变动较大,C端保守性强,N-末端含有一个叶绿体定位的信号肽.系统发育分析表明,GjCCD4蛋白与拟南芥和西红花的同源蛋白聚在同一个簇.在BL21(DE3)和AE(DE3)菌株的沉淀中表达出大量包涵体形式的融合蛋白,在BL21(DE3)菌株的上清中表达出少量可溶蛋白.[结论]获得了一个类胡萝卜素剪切双加氧酶基因GjCCD4,通过原核表达获得了少量可溶蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晓云		3	1	1.0	1.0
2	陈蓉		1	0	0.0	0.0
3	张恩慧		1	0	0.0	0.0