禽传染性支气管炎病毒H52反向遗传株的构建

• 作者: 姬高升 李然 杨鑫 王红宁 许记刚
• 来源期刊: 四川大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: IBV H52 反向遗传 H52-R
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 664-670
• 页数: 7页
• 分类号: Q789
• 字数: 4175字
• 语种: 中文
• DOI: 103969/j.issn.0490-6756.2016.05.031

摘要

IBV H52基因组全长27.6kb,分13个1.3～2.9kb的片段扩增H52全长cDNA,额外扩增N-3'片段,并克隆到载体PMD19-T上.利用No see'm技术在每个片段中引入Bsa Ⅰ或BsmB Ⅰ酶切位点,D1片段中引入沉默突变位点,在5'UTR端和N-3'引入T7启动子,3 'UTR端引入Poly(A)尾.将克隆好的13个片段酶切,纯化,体外无缝连接为全长cDNA.将全长cDNA及N-3'体外转录获得它们的转录体,将转录体共转染BHK-21细胞,48h后收获细胞液,将细胞液接种10日龄SPF鸡胚获得反向遗传株H52-R.在鸡胚中盲传5代后,通过RT-PCR对无义突变位点进行扩增及序列分析,在反向株H52-R中发现引入的无义突变位点.对反向株H52-R的一些生物学特性如HA、EID50等测定发现,H52-R的这些生物学特性与亲本株H52相似.