人酪氨酸蛋白激酶Lyn的真核表达、纯化及鉴定

• 作者: 庄斯慧 张佳凤 徐岚 熊玉锋 罗树红 郝文波
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 酪氨酸蛋白激酶Lyn 真核表达 蛋白纯化 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 42-47
• 页数: 6页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.01.008

摘要

[目的]构建含人酪氨酸蛋白激酶Lyn基因的载体并进行真核表达、纯化和研究其对细胞增殖的影响.[方法]提取人Hela细胞总RNA,用RT-PCR方法获得Lyn基因并克隆至pcDNA3.1(-)载体.经双酶切、PCR和测序方法鉴定后,将重组质粒瞬时转染HEK 293T细胞表达目的蛋白,应用组氨酸标签镍离子螯合磁珠纯化融合蛋白,通过Western Blot检测蛋白的表达及纯化,并用CCK-8法检测过表达Lyn后细胞增殖能力的变化.[结果]成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Lyn并进行瞬时表达和蛋白纯化,CCK-8法检测过表达Lyn的HEK 293T细胞的增殖能力显著性下降(P＜0.01).[结论]Lyn在HEK 293T细胞中成功瞬时表达及纯化,并可以使细胞的增殖能力受到明显抑制,为稳定表达和深入研究其生物学功能及作用机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝文波		44	69	4.0	5.0
2	罗树红		16	33	3.0	5.0
3	张佳凤		4	2	1.0	1.0
4	庄斯慧		3	5	1.0	2.0
5	徐岚		4	1	1.0	1.0
6	熊玉锋		3	3	1.0	1.0