基于颜色判定的RT-LAMP技术检测HCoV-NL63冠状病毒基因

• 作者: 张汀 汪圣强 耿合员 肖雨 苏川 谢晓谦 谭文杰
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: HCoV-NL63 RT-LAMP 快速检测
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 56-61
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

建立了一种适合于国境口岸简便、快速、灵敏和特异检测人冠状病毒NL63 (HCoV-NL63)的核酸检测方法.通过建立基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,针对HCoV-NL63核衣壳蛋白(Nucleoeapsid,N)基因序列设计出6条特异性引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min,在扩增前加入钙黄绿素作为反应指示剂,并结合浊度仪进行实时监测,以最终反应颜色变化作为结果判断标准.利用该方法对同种属其他人冠状病毒、诺如病毒、流感病毒进行检测,以分析该方法的诊断特异性.应用该方法对梯度稀释的HCoV-NL63病毒RNA进行检测,以分析该方法的诊断灵敏性,并与常规real-time RT-PCR方法进行比较.结果显示,本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法在短时间内(40min)即可达到对HCoV-NL63的快速检测.该检测方法与加入其它病毒RNA模板溶液颜色均不产生改变,具有较高的检测特异性.检测灵敏性最低检测下限为1 600拷贝/反应.本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法可实现对HCoV-NL63冠状病毒现场快速检测,具有在国境口岸以及基层医疗机构和疫区现场推广应用的潜力.