以流式细胞术同时检测 caspase-1与碘化丙啶或 AnnexinⅤ分析小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡

• 作者: 刘雪 周晓辉 李顺 陈丽香
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: NLRP3 炎症小体 炎性死亡 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 149-154
• 页数: 6页
• 字数: 4830字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2016.02.013

摘要

目的：明确以流式细胞术同时检测 caspase-1与碘化丙啶或 AnnexinⅤ的方法测定小鼠骨髓巨噬细胞炎性死亡的可行性。方法从野生型(wild type,WT) C57BL/6小鼠和/或 C57BL/6背景的 caspase-1-/-小鼠分离骨髓细胞,巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor, M-CSF)刺激分化7 d 成为骨髓巨噬细胞后,分别进行磷酸盐缓冲液(PBS)、脂多糖(LPS)、LPS+ATP (三磷酸腺苷)处理。蛋白印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞和上清中的 IL-1β和 caspase-1的切割成熟及分泌情况；乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测细胞上清 LDH 的释放量；以3种流式细胞染色法：TMR red+caspase-1、PI(propidium iodide)+caspase-1和 AnnexinⅤ+caspase-1检测小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。结果 LPS+ATP 处理后,NLRP3炎症小体被激活(细胞和上清中有 IL-1β和 caspase-1的切割成熟和分泌)；WT 即 C57BL/6组细胞上清 LDH 的释放量多于 caspase-1-/-组,表明诱导发生的细胞死亡中存在依赖于 caspase-1的炎性死亡方式；流式细胞术同时检测 caspase-1与 PI 或 AnnexinⅤ,结果显示 LPS+ATP 处理组炎性死亡的百分比显著高于 PBS 组和 LPS 组,与已报道的流式检测 caspase-1+TMR red 方法的结果类似。结论流式细胞术同时检测 caspase-1与 PI 或 AnnexinⅤ的方法可用于确定小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。与已有的流式检测 caspase-1+TMR red 方法一样,这两种基于流式细胞术的炎性死亡的检测方法,为小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡提供了更加直观精准的检测手段。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李顺	复旦大学附属公共卫生临床中心	10	10	2.0	2.0
2	周晓辉	复旦大学附属公共卫生临床中心	13	19	3.0	3.0
3	刘雪	复旦大学附属公共卫生临床中心	3	5	1.0	2.0
4	陈丽香	复旦大学附属公共卫生临床中心	5	10	2.0	3.0