骨关节炎兔软骨细胞传代后膜电位的变化

• 作者: 傅世祥 孙静磊 师晨霞 武文婷 王晓峰 陈康
• 来源期刊: 中华关节外科杂志（电子版）
• 关键词: 骨关节炎 软骨细胞 膜电位 细胞分化 氯化物通道
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 305-311
• 页数: 7页
• 字数: 5195字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-134X.2016.03.013

摘要

目的：观察骨关节炎（ OA）与正常兔软骨细胞传代后静息膜电位（ RMP）的变化。方法采用经典Hulth法，制作兔双腿OA模型。手术后12周，体外酶解分离膝关节软骨细胞，并传代培养。采用qRT-PCR技术，观察对照组和OA组5代软骨细胞（P1～P5）的Ⅱ型胶原（COL2A1）、聚集蛋白聚糖（ACAN）和Ⅰ型胶原（COL1A1）mRNA表达的改变；同时采用膜片钳技术，测定5代细胞的RMP，并初步分析RMP变化机制。方差齐的OA组与对照组之间均数的比较采用两独立样本t检验；方差齐的多组均数比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Bonferroni法。结果对照组和OA组的P1～P3代细胞相似，呈卵圆形或多角形，P4～P5代细胞以成纤维细胞样的梭形为主。与对照组P1代细胞相比，OA组P1代细胞COL2A1和ACAN的mRNA表达减少（t＝5.90，P＜0.01；t＝3.46，P＜0.05）；两组间软骨细胞RMP的差异有统计学意义（t＝－8.0，P＜0.01）；电压依赖性氯通道ClC-3（CLCN3）的mRNA表达增加（t＝－17.7，P＜0.01），两组之间的差异具有统计学意义。分别与同组的P1代细胞相比，两组动物的P2～P5代软骨细胞的COL2A1和ACAN的mRNA表达逐渐减少，而COL1A1表达逐渐增多，对照组P1～P3代细胞RMP数值相似，P4代和P5代细胞数值减少（ F ＝47.75，P＜0.01）；而OA组前三代细胞RMP数值相似， P4代和P5代细胞数值增加（ F ＝15.41，P＜0.01）。结论 OA时软骨细胞RMP降低，可能与氯通道CLCN3的表达升高有关。正常和OA软骨细胞传代后均会发生去分化现象，RMP可以作为描述去分化的指标；正常和OA软骨细胞培养前3代可以保持各自的生物学特性，适合软骨组织再生修复及OA疾病研究使用。