家蚕核型多角体病毒lef-11基因RNA干扰策略的优化

• 作者: 潘敏慧 胡志刚 胡楠 董战旗 陈婷婷 鲁成
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 家蚕 家蚕核型多角体病毒 RNA干扰 lef-11 载体优化 启动子
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1561-1570
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150603

摘要

[目的]家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV) lef-11基因作为杆状病毒高度保守的晚期表达因子之一,对病毒晚期基因的表达极其重要.因此对lef-11基因进行有效RNA干扰将提高宿主细胞对BmNPV的抗性.[方法]本文基于经典的sh-RNA-loop骨架及家蚕内源性的miRNA骨架,构建以BmNPV lef-1基因为靶标的干扰载体pIZ-shRNA1、pIZ-shRNA2和pIZ-DsRed-amiR279;分别构建基于A4、IE1、IE1-295、IE2、IE2-339、hr3A4和hsp70启动子驱动的干扰载体,用以评价不同启动子驱动的干扰载体的抗病毒效果,并对干扰载体进行优化.[结果]首先,本文通过比较miRNA-based和shRNA-based RNAi载体对同一靶基因同一位点的干扰效率,发现pIZ-DsRed-amiR279对BmNPV lef11基因的干扰效率超过90％,远优于shRNA-based RNAi载体的干扰效果;其次,通过对干扰载体进行优化,发现IE1启动子的效果最优,由其驱动的pIZ-DsRed-milef1 1干扰载体也是本研究中的最优干扰载体,对病毒的增殖抑制效果最为明显.[结论]对目的基因的干扰效果并非启动子的活性越高、miRNA积累得越多就越好,只有综合考虑干扰片段的选择、启动子的活性以及靶基因自身的功能等多方面的因素,才能提高干扰效率,达到干扰目的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲁成	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	116	646	13.0	17.0
5	胡志刚	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	8	14	2.0	3.0
6	陈婷婷	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	11	67	4.0	8.0
7	董战旗	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	7	13	3.0	3.0
8	胡楠	西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室	8	16	3.0	3.0