促血小板生成素模拟肽二联体连接肽的筛选

• 作者: 史彦斌 支德娟 李红玉 王亚军 王海晴 王燕萍
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 促血小板生成素模拟肽 融合蛋白 原核表达 双荧光素酶检测 亲和层析 生物活性
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 99-102
• 页数: 4页
• 分类号: Q516
• 语种: 中文

摘要

比较不同Linker连接的促血小板生成素模拟肽二联体(dTMP)的生物活性,筛选高生物活性dTMP的Linker设计.全基因合成4个dTMP基因,将片段克隆到pGEX-4T-1载体,构建重组表达载体pGEX-4T-1/dT-MP,筛选阳性目的克隆,转化大肠杆菌BL21(DE3),0.1 mmol/L IPTG诱导表达融合蛋白.超声细胞破碎仪破菌,Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析获得GST-dTMP融合蛋白,凝血酶酶切,再次亲和层析除去GST标签,收集目的dTMP肽片段,双荧光素酶法检测各目的肽片段的活性.通过实验,正确构建了4个不同的pGEX-4T-1/dTMP表达载体,经表达纯化得到了GST-dTMP融合蛋白,酶切后再次亲和层析纯化,并获得了相对分子质量与理论值3 920,3 640,3 610,3 430相符的4个dTMP肽片段,它们的活性大小依次为:dTMP-Linker3＞ dTMP-Linker4＞dTMP-Linker1＞dTMP-Linker2.实验发现,不同的连接肽显著影响dTMP肽片段的生物活性,该实验成功筛选到了活性较高的连接肽Linker3.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李红玉		87	864	17.0	25.0
2	支德娟		5	10	1.0	3.0
3	王燕萍		38	192	8.0	13.0
4	王亚军		29	571	9.0	23.0
5	史彦斌		32	155	9.0	11.0
6	王海晴		2	6	1.0	2.0