MMP3慢病毒表达载体构建及其修饰的胚胎干细胞的作用

• 作者: 吴丛梅 常鹏宇 殷玉和 董丽华 董微 陈旭东
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: MMP3 ES 慢病毒载体 纤维化
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 325-330
• 页数: 6页
• 分类号: R783.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.04.0056

摘要

[目的]构建基质金属蛋白酶3(Matrix metalloproteinase3,MMP3)基因过表达慢病毒载体,修饰胚胎干细胞(ES)检测其对成纤维细胞的作用.[方法]克隆MMP3基因,构建EGFP标记的MMP3慢病毒表达载体,用GP2-293T细胞包装慢病毒,修饰ES细胞,与成纤维细胞3T3共培养.镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western Blot检测MMP3和TGF-β蛋白表达.[结果]成功钓取MMP3基因,并构建慢病毒表达载体LV-MMP3-EGFP;在转染的GP2-293T细胞中表达绿色荧光蛋白;修饰后的ES细胞表达绿色荧光蛋白,72 h蛋白表达量最高,转染效率达到80％以上;被修饰细胞中MMP3蛋白表达高于对照组,其表达量是对照组的1.5倍;共培养后3T3细胞中TGF-β蛋白表达实验组与对照组无显著变化.[结论]LV-MMP3-EGFP修饰的ES细胞能够大量表达MMP3蛋白,作用于细胞外基质,但是对成纤维细胞中TGF-β表达没有显著影响(P＞0.05).