重组人转化生长因子β1在CHO/dhfr-细胞中的稳定表达和纯化

• 作者: 刘春凤 周婷 张宁 王世媛 陈清西
• 来源期刊: 厦门大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人转化生长因子β1 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 页码范围: 67-71
• 页数: 5页
• 分类号: Q356.1
• 字数: 4933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6043/j.issn.0438-0479.2016.01.012

摘要

构建了含重组人转化生长因子β1(rh TGF-β1)基因的真核表达载体,并利用阳离子脂质体介导的方法,将构建的表达载体转染到二氢叶酸还原酶(DHFR)缺陷型哺乳动物细胞CHO/dhfr-中,通过氨甲喋呤(MTX)加压筛选获得稳定表达重组人转化生长因子β1的细胞株.于14 L细胞发酵罐进行扩大培养,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测得表达量在3 mg/L左右.采用亲和层析、反相层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化,获得的rhTGF-β1试制品的纯度大于97％,得率在25％以上.通过基质辅助激光解析电离化飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定rhTGF-β1的分子量为25.470 ku,与理论分子量一致.N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列,与理论的氨基酸序列一致.rhTGF-β1具有抑制水貂肺上皮细胞Mv-1-Lu增殖的活性,测定其比活为3.2×107 IU/mg,与商品化的rhTGF-β1标准品相当.本研究为进一步规模化制备rh TGF-β1奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈清西	厦门大学生命科学学院	114	2033	24.0	40.0
2	张宁		2	0	0.0	0.0
3	王世媛		3	1	1.0	1.0
4	刘春凤	厦门大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	周婷		2	0	0.0	0.0