GP5△84-119稳定表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响

• 作者: 周恩民 姜博 宋林林 李亮亮 王晓红 穆杨 袁传奇
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5Δ84-119 稳定表达 复制 干扰素
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 315-324
• 页数: 10页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 7322字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.02.014

摘要

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构蛋白GP5的第二胞外区在病毒复制中的作用及机制,利用PiggyBac Transposon System Vectors构建了表达删除84-119氨基酸残基的截短型GP5的重组质粒(pPBGP5Δ84-119),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆,筛选稳定表达GP5Δ84-119的Marc-145细胞系,并利用cck-8试剂盒检测细胞的增殖情况;用PRRSV SD16株感染筛选的细胞,通过病毒基因拷贝数和病毒滴度检测GP5Δ84-119表达对PRRSV复制影响;通过Real-time PCR和ELISA检测病毒感染前后细胞IFN-α、IFN-β、IFN-γ的表达情况.经RT-PCR、Western blot和IFA检测,GP5Δ84-119在Marc-145细胞中获得稳定表达,将此细胞命名为Marc-145-GP5Δ84-119;细胞增殖曲线显示GP5Δ84-119的表达不影响细胞的增殖;对病毒基因拷贝数和病毒滴度检测发现GP5Δ84-119的表达可以抑制PRRSV的复制,这种抑制作用可能是通过上调IFN特别是IFN-β的表达而实现的.研究表明GP5第二胞外区在PRRSV复制中发挥重要作用.