添加扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 付绪磊 仪淑敏 励建荣 张德福 张明 徐永霞 李春 殷喆 赵禹宗
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 单增李斯特菌 聚合酶链式反应 检测方法 扩增内标 内化素基因
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 分析与检测
• 页码范围: 192-196
• 页数: 5页
• 字数: 3433字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201609033

摘要

以单增李斯特菌inlA基因为靶基因,设计一对特异性引物,以16S rRNA为扩增内标对照,建立了一种含有扩增内标的单增李斯特菌PCR检测方法.优化了PCR反应体系,并对PCR检测方法的特异性、灵敏度、人工污染样品及食品样品检测效果进行了测试.对2株单增李斯特菌、1株英诺克李斯特菌以及19株非李斯特菌菌株进行PCR检测,结果显示,只有2株单增李斯特菌能被检出大小为826 bp的特异性片段,其余20株细菌只能检出1 500 bp的扩增内标片段.灵敏度实验结果显示,基因组DNA和纯培养物的最低检出限分别为1.80×102 fg/μL和1.21×102 CFU/mL.当人工污染牛乳样品中单增李斯特菌在最低接种量为0.48 CFU/mL时,经8h增菌培养后可被该方法检出.采用该研究建立的检测方法对36种食品样品进行检测,证实了该检测方法可以指示检测过程中出现的假阴性现象.综上所述,该研究建立的PCR检测方法能特异性的检测单增李斯特菌,并可有效排除检测过程中出现的假阴性现象,提高检测的准确性.