田鼠巴贝虫感染FTA-环介导等温扩增检测技术的建立

• 作者: 卢艳 吴秀萍 吴芬 秦志强 艾琳 蔡玉春 陈家旭 陈绍红
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 田鼠巴贝虫 环介导等温扩增技术 FTA卡 细胞色素B基因
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 435-441
• 页数: 7页
• 分类号: R382
• 字数: 5339字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.05.004

摘要

目的 建立敏感、特异、高效的检测田鼠巴贝虫FTA-环介导等温扩增技术(LAMP).方法 根据GenBank公布的田鼠巴贝虫基因序列,就细胞色素B基因保守序列设计了多套LAMP引物,利用LAMP RealTime Turbidimeter LA-320仪筛选最佳引物、反应条件,建立LAMP检测方法,从保存有血液样本的FTA卡片中提取田鼠巴贝虫DNA进行LAMP,观察检测效果.结果 设计的4组引物做LAMP试验,其中以引物1,最佳反应温度为64℃,恒温下作用,敏感性高,可在1h内完成,其检出限量为0.687 fg/μL,而PCR的最低检测量为0.687 pg/μL,与间日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、诺氏疟原虫、冈地弓形虫、利什曼原虫、冈比亚锥虫均无交叉反应.以建立的FTA-LAMP法检测20份PCR检测阳性的田鼠巴贝虫感染者血样,其阳性符合率100％.结论 成功建立了检测田鼠巴贝虫特异性细胞色素B基因的FTA-LAMP方法,该法特异性强、灵敏度高、简便、快速、适于现场应用.