烧伤脓毒症小鼠早期外周血T淋巴细胞中三种标志物的表达变化及免疫调控机制

• 作者: 任利成 周宇翔 周捷 张丕红 曾纪章 梁鹏飞 黄晓元 黄鹏
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 烧伤 脓毒症 淋巴细胞 膜联蛋白A1 GATA3转录因子 T-bet
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 感染与免疫
• 页码范围: 89-96
• 页数: 8页
• 字数: 5980字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2016.02.007

摘要

目的 观察烧伤脓毒症小鼠伤后早期外周血T淋巴细胞中膜联蛋白A1(ANXA1)、GATA-3、T-bet的表达情况,分析3种标志物的免疫调控机制. 方法 将780只清洁级雄性小鼠按随机数字表法分为假伤组60只、烧伤组240只、脓毒症组240只及烧伤脓毒症组240只.假伤组小鼠背部于37 ℃温水中浸浴10s模拟致伤;烧伤组小鼠背部于100 ℃沸水中浸浴10 s造成20％ TBSA深Ⅱ度烧伤;脓毒症组小鼠腹腔注射LPS(6 mg/kg);烧伤脓毒症组小鼠同烧伤组处理后,立即同脓毒症组腹腔注射等剂量LPS.(1)伤后即刻,假伤组按照随机数字表法选取6只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液.其余3组按照随机数字表法,于伤后12、24、48及72 h各选取6只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液.每管细胞悬液等分为2份,一份加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的人抗小鼠CD4单克隆抗体、藻红蛋白(PE)标记的人抗小鼠γ干扰素单克隆抗体,以标记Th1;另一份加入FITC标记的人抗小鼠CD4单克隆抗体、PE标记的人抗小鼠IL-4单克隆抗体,以标记Th2.采用流式细胞仪检测Th1、Th2百分比,并计算Th 1/Th2比值.(2)伤后即刻,假伤组按照随机数字表法取18只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液.其余3组按照随机数字表法,于伤后12、24、48及72 h各选取18只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液.采用实时荧光定量RT-PCR法检测淋巴细胞中ANXA1、GATA-3、T-bet mRNA的表达量.(3)伤后即刻,假伤组按照随机数字表法取36只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液,分成6次进行实验.一次取6管细胞悬液分别加入6种抗体组合:标记Th1和Th2的抗体分别与PE-花青素7标记的人抗小鼠ANXA1单克隆抗体、PE-花青素7标记的人抗小鼠GATA-3单克隆抗体、PE-花青素7标记的人抗小鼠T-bet单克隆抗体联用,以分别标记Th1、Th2的3种标志物.其余3组按照随机数字表法,于伤后12、24、48及72 h各取36只小鼠,每只小鼠收集1管外周血淋巴细胞悬液,各时相点分成6次进行实验.一次取6管细胞悬液分别加入上述6种抗体组合进行标记.采用流式细胞仪检测Th1、Th2中ANXA1、GATA-3、T-bet 3种标志物的阳性细胞百分比.对数据行单因素方差分析、析因设计方差分析、SNK检验.对淋巴细胞中的ANXA1 mRNA与GATA-3 mRNA表达量及Th1、Th2中ANXA1阳性细胞百分比与GATA-3阳性细胞百分比均行直线相关分析. 结果 (1)与假伤组伤后即刻比较,烧伤组小鼠淋巴细胞中Th1、Th2百分比及Th1/Th2比值从伤后24 h起明显降低(P值均小于0.05),脓毒症组及烧伤脓毒症组小鼠淋巴细胞中Th1、Th2百分比及Th 1/Th2比值从伤后12 h起明显降低(P值均小于0.05).(2)与假伤组伤后即刻比较,烧伤组小鼠淋巴细胞中ANXA1和GATA-3 mRNA表达量从伤后24 h起明显下降(P值均小于0.05);T-bet mRNA表达量于伤后24 h明显下降,但伤后48、72 h明显升高,P值均小于0.05.与假伤组伤后即刻比较,脓毒症组小鼠淋巴细胞中ANXA1和GATA-3 mRNA表达量从伤后12h起明显降低,T-bet mRNA表达量从伤后12 h起明显增加,P值均小于0.05;烧伤脓毒症组小鼠淋巴细胞中ANXA1、GATA-3、T-bet mRNA表达量从伤后12 h起明显降低(P值均小于0.05),于伤后72 h达最低值(分别为0.50 ±0.04、0.45±0.03、0.21 ±0.05).(3)淋巴细胞中ANXA1 mRNA表达量与GATA-3 mRNA表达量呈明显正相关(r=0.862,P＜0.05).(4)与假伤组伤后即刻比较,烧伤组小鼠Th1、Th2中ANXA1、GATA-3阳性细胞百分比从伤后24 h起均明显降低,T-bet阳性细胞百分比于伤后24 h明显降低,但从伤后48 h起明显升高,P值均小于0.05.脓毒症组小鼠Th1和Th2中ANXA1、GATA-3阳性细胞百分比从伤后12 h起持续下调,大部分时相点显著低于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05);T-bet阳性细胞百分比从伤后12h起明显高于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05).烧伤脓毒症组小鼠Th1和Th2中ANXA1、GATA-3、T-bet 3种标志物的阳性细胞百分比从伤后12 h起持续下调,大部分时相点显著低于假伤组伤后即刻(P值均小于0.05).(5)在Th1、Th2中,GATA-3阳性细胞百分比与ANXA1阳性细胞百分比均呈明显正相关(r值分别为0.747、0.787,P值均小于0.05). 结论 在烧伤脓毒症小鼠中,ANXA1、GATA-3及T-bet表达持续下调,在Th1/Th2平衡向Th2方向漂移及免疫抑制过程中发挥重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张丕红	中南大学湘雅医院烧伤重建外科	48	234	9.0	13.0
2	曾纪章	中南大学湘雅医院烧伤重建外科	27	120	7.0	9.0
3	任利成	中南大学湘雅医院烧伤重建外科	36	96	6.0	8.0
4	黄晓元	中南大学湘雅医院烧伤重建外科	111	667	13.0	18.0
5	黄鹏	中南大学湘雅医院烧伤重建外科	19	96	7.0	8.0
6	周捷	中南大学湘雅医院烧伤重建外科	16	71	6.0	7.0
7	梁鹏飞	中南大学湘雅医院烧伤重建外科	22	118	7.0	10.0
8	周宇翔	湖南省儿童医院急诊综合外科	7	28	3.0	5.0