过表达Notch1胞内域对c-Kit+骨髓间充质干细胞分化的影响

• 作者: 丁然然 哈艳平 揭伟 王可可 王振良 申志华 蒋晓帆 雷洪
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 骨髓干细胞 细胞分化 Notch信号 腺病毒载体 病毒包装 骨髓间充质干细胞 c-Kit 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究与报告 -- 骨髓干细胞
• 页码范围: 785-792
• 页数: 8页
• 分类号: R394.2
• 字数: 8053字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.06.004

摘要

背景：Notch信号活化对干细胞分化有重要的影响，其效应具有细胞特异性，但有关Notch信号与c-Kit+骨髓间充质干细胞分化的相关报道较少。目的：分析Notch1信号活化对c-Kit+骨髓间充质干细胞分化的影响。方法：应用PCR从cDNA文库中调取Notch1受体胞内域(N1-ICD)序列，定向克隆入腺病毒穿梭质粒GV314构建重组质粒，与腺病毒辅助包装质粒pBHGlox?E1,3 Cre在HEK293T细胞进行同源重组，获得N1-ICD过表达腺病毒颗粒(N1-ICD-Ad)。分离SD大鼠股骨骨髓间充质干细胞，应用磁激活细胞分选法分选出c-Kit+亚群并用流式鉴定其纯度。将N1-ICD-Ad腺病毒感染c-Kit+骨髓间充质干细胞，8 d后定量RT-PCR或免疫荧光分析c-Kit+骨髓间充质干细胞中Notch1信号的活化及细胞的分化。结果与结论：(1)从cDNA文库中成功获得N1-ICD序列，将此序列成功克隆入线性化GV314载体，抗性克隆经测序证实无误；(2)在辅助包装质粒pBHGloxΔE1,3 Cre的协助下，成功获得滴度为2×1012 PFU/L重组腺病毒颗粒N1-ICD-Ad；(3)成功从SD大鼠骨髓间充质干细胞获得c-Kit+细胞亚群，纯度达91.6%。包装的腺病毒能有效感染c-Kit+骨髓间充质干细胞；(4)与空白对照组和阴性对照病毒组相比， N1-ICD-Ad 感染 c-Kit+骨髓间充质干细胞后 N1-ICD 在胞质与胞核聚集，显著上调了 Notch 下游基因Hes1的表达，显著诱导心肌细胞分化基因Nkx2.5和cTnT的表达，显著上调内皮细胞分化基因vWF的表达，轻微上调平滑肌细胞分化基因SM22α的表达。(5)实验结果提示Notch1信号的活化有助于c-Kit+骨髓间充质干细胞的多向分化，N1-ICD 过表达载体构建及腺病毒的包装并转染成功，为进一步研究Notch1信号活化对于干细胞生物学功能的影响奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	申志华	广东医学院病理学系	22	158	7.0	12.0
2	揭伟	广东医学院病理学系	29	176	7.0	12.0
3	蒋晓帆	广东医学院病理学系	2	7	1.0	2.0
4	丁然然	广东医学院病理学系	2	7	1.0	2.0
5	哈艳平	广东医学院病理学系	1	7	1.0	1.0
6	王振良	广东医学院病理学系	1	7	1.0	1.0
7	雷洪	广东医学院病理学系	1	7	1.0	1.0
8	王可可	广东医学院病理学系	1	7	1.0	1.0