烟草液泡pH相关基因NtPH1的CRISPR/Cas9敲除载体的构建

• 作者: 崔超军 李嘉敏 汪敏 洪晓喻 祝钦泷 陈君宇 马坤
• 来源期刊: 植物学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 烟草 液泡pH NtPH1 CRISPR/Cas9系统 载体构建
• 年，卷（期）: zwxyj_2016,（4）
• 页码范围: 132-138
• 页数: 7页
• 分类号: Q7

摘要

植物液泡pH的碱性程度是蓝色花形成的一个重要因素。烟草NtPH1是矮牵牛蓝色花形成相关的控制液泡pH的PhPH1基因的直系同源基因。为了研究其功能,本研究利用植物CRISPR/Cas9系统构建NtPH1的双靶点敲除载体。通过对NtPH1基因片段的序列分析,选择两个PAM序列相距60 bp的位点作为靶序列,通过重叠PCR直接把两个靶位点分别拼接到AtU6-29和AtU6-26两个启动子驱动的sgRNA表达盒上,再利用Golden Gate克隆的方法把其连入pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体,重组克隆经菌落PCR筛选、质粒DNA酶切鉴定与测序,获得了NtPH1基因的双靶点敲除载体pCas9-PH1T1T2。这为进一步开展NtPH1基因的功能研究与蓝色花的基因工程应用奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李嘉敏	华南农业大学生命科学学院	5	0	0.0	0.0
2	祝钦泷	华南农业大学生命科学学院	5	6	1.0	2.0
3	汪敏	华南农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	马坤	华南农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
5	洪晓喻	华南农业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
6	崔超军	华南农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
7	陈君宇	华南农业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0