中华绒螯蟹脂肪酸延长酶(ELDVL)基因全长cDNA的克隆及其表达分析

• 作者: 姚琴琴 徐泽文 徐蕾 成永旭 施秋燕 杨志刚 杨青 柳梅梅 阙有清
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 中华绒螯蟹 脂肪酸延长酶 基因克隆 表达分析
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 53-63
• 页数: 11页
• 分类号: S917
• 字数: 8067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.15159

摘要

根据脂肪酸延长酶保守区序列设计引物,采用RT-PCR和RACE技术首次克隆得到中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)脂肪酸延长酶(ELOVL)基因全长(GenBank登录号:KR005628).分析ELOVL序列表明,该基因cDNA全长2089 bp,开放阅读框(ORF)长1065 bp(包含终止密码子),编码的354个氨基酸具有典型的延长酶特征:1个高度保守的氧化还原中心组氨酸簇HVIHH,多个保守区和多个跨膜区(KFTEFLDT、NTFVHWMYVYY、TNFQMI).经氨基酸同源性和系统发育树分析,中华绒螯蟹ELOVL预测氨基酸序列与顶切叶蚁(Acromyrmex echinatior)ELOVL氨基酸序列相似性最高,为59％;同时与家蝇(Musca domestica)聚为一支,进而与日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)等聚为一大支.通过实时荧光定量PCR技术研究ELOVL mRNA在中华绒螯蟹不同组织中的表达量,及投喂不同配合饲料后在可食部位组织中的表达情况.结果显示,ELOVL在各组织中均有表达,在肝胰腺和肠道中表达量最高,心脏中最低,其他组织中少量表达.养殖98 d后分析表明,卵巢和肝胰腺组织中ELOVL mRNA在SO饲料组中表达量最高,并且表达水平随着饲料中鱼油(富含n-3 PUFA)比例减少、豆油(缺少n-3 PUFA)比例增加而显著升高(P＜0.05);精巢组织中ELOVL mKNA表达量在SO饲料组中最高;肌肉组织中ELOVL mKNA表达水平较低,且各饲料组间表达量差异不显著(P＞0.05).以上结果表明,中华绒螯蟹存在ELOVL基因,并且ELOVL的表达受饲料脂肪水平的影响,这为探究中华绒螯蟹自身合成HUFA途径及调节机制奠定了基础.