RMND5 B基因的克隆及其腺病毒载体的构建

• 作者: 刘文邦 吴秀山 尹丽阳 崔俊毅 张仕超 朱旋 王跃群 范雄伟 蔡英桂 陈宇 陈辉
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 RMND5B 心肌细胞
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 350-355
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 3720字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2016.04.011

摘要

已有研究表明 RMND5B 可能与心肌肥大相关，但具体机制不明，RMND5B 的重组腺病毒载体的构建和鉴定为研究 RMND5B 功能提供了基础工具。首先，设计小鼠 RMND5B 基因的特异性引物，以 cDNA 为模板， PCR 扩增 RMND5B ORF 区，并在两端各加入 Hind Ⅲ及 SalⅠ的酶切位点。将此片段插入到 pMD18-T 载体，再亚克隆至线性化的穿梭质粒 pAdTrack-CMV 中。PmeⅠ酶切线性化之后，电转化到含 pAdEasy-1的 BJ5183感受态细菌中。在 BJ5183细菌中发生同源重组获得了重组质粒 pAd-RMND5B 质粒。PacⅠ酶切线性化之后转染293A细胞，经过包装获得腺病毒 AdRMND5B。将此腺病毒感染新生大鼠原代心肌细胞，并在一段时间后观察绿色荧光并通过 RT-PCR 检测 RMND5B 的表达情况。结果表明，成功构建了 RMND5B 的重组腺病毒载体并实现了 Ad-RMND5B 在新生大鼠原代心肌细胞中表达，为进一步研究 RMND5B 基因在心肌肥大中的作用奠定了良好的实验基础。