不同氮处理茶树实时定量 PCR 内参基因筛选和验证

• 作者: 刘圆 吴立赟 张芬 成浩 王丽鸳 胡娟 韦康
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 内参基因 氮处理 qRT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 页码范围: 92-101
• 页数: 10页
• 分类号: S571.1|S143.1
• 字数: 5168字
• 语种: 中文

摘要

为筛选不同氮处理下茶树（Camellia sinensis）实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）试验体系中最佳内参基因，以茶树幼叶、成熟叶和幼根为材料，应用 qRT-PCR 分析 GAPDH、18S rRNA、β-actin、 RPL13、a-tubulin、RuBP 等6个内参基因在不同氮浓度和氮源处理下的表达变化，借助 GeNorm 和 NormFinder 程序对候选内参基因稳定性进行评价。结果表明，在不同氮浓度和氮源处理下，GAPDH、b-actin 和 RPL13表达稳定性较好，GAPDH+β-actin 组合稳定性最佳，可用作茶树基因表达研究的内参基因；而a-tubulin 和 RuBP 表达稳定性较差，不适合做内参基因。为进一步证实上述结果，分别以 GAPDH、a-tubulin 、GAPDH+β-actin 组合为内参基因，分析茶树幼叶中硝酸根转运蛋白基因（CsNRT1.2）和铵根转运蛋白基因（CsAMT1.1）的表达水平，发现以 GAPDH 和 GAPDH+β-actin 组合为内参基因时，目的基因的相对表达量随处理时间延长变化规律基本一致；而以a-tubulin 为内参基因时，目的基因的变化规律与前两者存在明显差别。因此，根据特定试验体系选择合适的内参基因对于 qRT-PCR 定量结果的准确性和可靠性具有重要意义。