CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫*耐受中的机制研究

• 作者: 王佳 王维 马小倩
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4 小分子RNA T调节细胞 异种抗原 免疫应答
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 342-349
• 页数: 8页
• 分类号: R392.4
• 字数: 5322字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2016.04.010

摘要

目的：通过靶向 CTLA4 siRNA 探讨 CTLA4在 T 调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法：体外扩增培养利用磁珠分选出的 T 调节细胞，AO ／PI 染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线，流式细胞仪检测扩增后细胞表型；采用 Alex488染料标记 siRNA，通过流式细胞仪检测 siRNA 的转染效率；实时定量 PCR 检测靶向 CTLA4 siRNA 的沉默效率；流式细胞术检测 CTLA4在蛋白水平的变化；混合淋巴实验检测 CTLA4表达下调后，T 调节细胞的功能变化。结果：经过4周体外扩增，T 调节细胞能够增长约1200倍，并具有高活率和高纯度；siRNA 的转染效率为61．8％±4．5％；Realtime PCR 和流式细胞术检测 CTLA4在 mR-NA 水平和蛋白水平均有不同程度下降，其结果与对照组相比差异显著（P ＜0．05）；混合淋巴实验结果显示 T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖，Treg 细胞能够抑制这种增殖，但是 CTLA4表达下调后明显减弱了T 调节细胞的抑制能力。进一步，在 DC 细胞参与的混合淋巴实验中发现 Treg 能够通过 DC 抑制 T 效应细胞对异种抗原的应答，而 siCTLA4-Treg 不能通过 DC 抑制 T 效应细胞增殖。结论：CTLA4在 Treg 介导的异种免疫应答中发挥着重要作用，这种作用方式可能是通过直接作用于 T 效应细胞或者间接通过 DC 细胞作用于 T 效应细胞发挥作用。靶向 CTLA4 siRNA 能够下调 Treg 细胞 CTLA4的表达，影响 Treg 细胞抑制异种抗原引起 T 效应细胞应答的能力。